Mafia: Definitive Edition conta a história de Tommy Angelo, um taxista trabalhador que mal consegue pagar as contas na cidade americana de Lost Heaven nos idos de 1930. Em uma noite fatídica, ele tem um encontro inesperado com a Máfia Italiana, que mostra a ele uma vida de recompensas grandes demais para se ignorar. Agora ele se vê envolvido no violento mundo do crime organizado, fazendo trabalhos para a organização de Don Salieri, que está em guerra contra uma cruel família de mafiosos, os Morello. Como Tommy, você deverá estabelecer-se no traiçoeiro submundo de Lost Heaven, onde nem tudo é o que se parece — inclusive a certeza de quem são seus aliados e inimigos.